Práctica 4. ASO-Latex. Aglutinación en tarjeta 15/10/2019

OBJETIVOS

•  El objetivo de esta práctica es detectar anti-estreptolisina O (ASO) en suero humano.

UTILIDAD CLÍNICA

• La estreptolisina O es una exoenzima inmunogénico tóxico producido por estreptococos β-hemolíticos de los grupos A, C Y G. La cuantificación de los anticuerpos ASO se utiliza para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades como las fieberes reumáticas, glomerulonefritis aguda, y otras infecciones estreptocócicas. Las fiebres reumáticas es una enfermedad inflamatoria que afecta al tejido conectivo de diversas zonas del cuerpo humano y la glomerulonefritis aguda es una inflamación del riñón que afecta principalmente a los glomérulos renales.

FUNDAMENTOS

• El ASO-Látex es una técnica de aglutinación para la detección cualitativa y semicuantitativa de anti-estreptolisina O (ASO) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con estreptolisina O (SLO) son aglutinadas por anticuerpos ASO presentes en la muestra del paciente.

MATERIALES

Tarjeta látex

Bote para desechos

Micropipeta y puntas

REACTIVOS

Látex

PROCEDIMIENTO

• PREPARAMOS CONTROL POSITIVO Y NEGATIVO.

1. Atemperamos los controles a temperatura ambiente.
2. Depositamos una gota (50 μL) de control positivo y control negativo en diferentes círculos de la tarjeta de látex.
3. Mezclamos el reactivo de ASO-Látex vigorosamente antes de usar. Depositamos una gota junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclamos las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Es muy importante emplear palillos distintos para cada muestra.
   
5. Agitamos con cuidado la tarjeta durante 2 minutos para que aparezcan los resultados.
   

• MÉTODO SEMICUANTITATIVO. 

1. Depositamos una gota de solución salina fisiológica sobre cada uno de los seis círculos de la tarjeta.
   
2. Depositamos 50 μL de muestra en el primer círculo.
3. Realizamos diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L. El volumen de paso es de 50 μL.
4. Pasamos 50 μL del primer círculo al número 2 y resuspendemos.
5. Pasamos 50 μL del círculo 2 al número 3 y resuspendemos.
6. Pasamos 50 μL del círculo 3 al número 4 y resuspendemos.
7. Pasamos 50 μL del círculo 4 al número 5 y resuspendemos.
   
8. Pasamos 50 μL del círculo 5 al número 6, resuspendemos y desechamos 50 μL.    
9. Añadimos una gota de látex a cada uno de los círculos y mezclamos las gotas con un palillo.
   
10. Agitamos con cuidado la tarjeta durante 2 minutos y esperamos a que aparezcan los resultados.

RESULTADOS

•  Examinamos macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación comparándola con el control positivo y negativo.
  
   
• Observamos aglutinación hasta el círculo número 2, por lo que su título sería 2.
• La concentración aproximada de ASO en la muestra del paciente se obtiene: 200 x Títutlo de ASO =  μL/mL, así que: 200 x 2 = 400 μL/mL.