Práctica 11. Determinación del título de anti-SLO

OBJETIVOS

El objetivo de esta práctica es realizar una determinación del título anti-SLO en suero humano.

El carácter inmunogénico de la SLO permite valorar la extensión de una infección estreptocócica, por simple titulación del nivel en suero de anticuerpo anti-SLO.
Diluciones crecientes del suero problema se enfrentan con una cantidad constante de SLO, en presencia de una suspensión de hematíes, determinándose la dilución de suero más alta capaz de inhibir el poder hemolítico de la toxina.

Streptococcus pyogenes es la causa bacteriana más frecuente de faringitis aguda y también origina distintas infecciones cutáneas y sistémicas. La infección puede acarrear dos secuelas, la fiebre reumática aguda y la glomerulonefritis aguda postestreptocócica.
La mayor parte de las cepas de estreptococos del grupo A también elabora una hemolisina, la estreptolisina O provoca hemólisis de los hematíes.
La estreptolisina O tiene carácter antigénico y en la clínica, la técnica serológica más utilizada para detectar la infección estreptocócica del grupo A, es la titulación de los anticuerpos antiestreptolisina O (ASO) en el suero del ser humano.

Dispensamos 50 μL de tampón en cada pocillo de dos filas de la placa.
Añadimos 50 μL de la dilución 1:10 al primer pocillo de la fila A.
Añadimos 50 μL de la dilución 1:25 al primer pocillo de la fila B.
A partir del primer pocillo efectuamos sucesivas diluciones con la ayuda de un microdiluidor, por pases de 50 μL.
Añadimos 25 μL de disolución de estreptolisina O rehidratada a todos los pocillos excepto en el último de la fila B.
Agitamos suavemente e incubamos 15 minutos a 37ºC.
Añadimos 25 μL de suspensión de hematíes al 3% a cada pocillo.
Agitamos suavemente e incubamos 45 minutos a 37ºC, agitando después de los primeros 15 minutos.
Dejamos sedimentar durante unos 50-60 minutos a temperatura ambiente.