Práctica 12. Interacción antígeno- anticuerpo. El procedimiento Ouchterlony 10/12/2019

OBJETIVOS

El objetivo de esta práctica es introducir los principios de las interacciones antígeno-anticuerpo usando el procedimiento Ouchterlony.

Las interacciones de un anticuerpo con un antígeno es la reacción fundamental de la inmunología.
La mayoría de los antígenos son proteínas. La identidad exacta de los grupos que reaccionan con el anticuerpo generalmente no se conoce. La precipitación ocurre con la mayoría de los antígenos debido a que el antígeno es multivlente. Los anticuerpos tienen al menos dos sitios de unión a antígeno, por lo que se forman grandes agregados o retículos de antígeno y anticuerpo.
A medida que se agrega más antígeno, la cantidad de proteína precipitada aumenta hasta que las moléculas de antígeno y anticuerpo están en una proporción óptima.
La doble difusión en dos dimensiones es un procedimiento simple. Las soluciones de antígeno y anticuerpo se colocan en pocillos separados cortados en una placa de agarosa. Los reactivos se difunden desde los pozos uno hacia el otro y precipitan donde se encuentran en proporciones equivalentes.

En un matraz o vaso de precipitados de 500 ml, agregamos todo el contenido del paquete a 225 de agua destilada. Agitamos la suspensión para dispersar los grumos.
Debemos calentar el matraz hasta disolver la agarosa. Debe verse claor y transparente.
Enfriamos la solución a 55ºC y pipeteamos cuidadosamente 5 ml de agarosa líquida en cada placa.
Dejamos que la agarosa solidifique, tardará 10-15 minutos.

Colocamos la plantilla debajo de una de las placas.
Cortamos los cinco pocilos con el cortador de pocillos, con un suave movimiento de perforación.
Repetimos los pasos con las tres placas.

Llenamos los pocillos centrales de las tres placas con 30 microlitros de antisuero del tubo A.
Llenamos los pocillos externos con 30 microlitros de antígeno usando una punta de pipeta limpia para cada antígeno:

Colocamos las tapas en las placas. Colocamos las placas en la cámara de incubación sobre una capa de toallas de papel húmeas. Dejamos incubar durante 48 horas para leer los resultados.