Práctica 3. PCR-Látex. Aglutinación en tarjeta 01/10/2019

OBJETIVOS

•  El objetivo de esta práctica es detectar PCR en suero humano.

UTILIDAD CLÍNICA

• La Proteína C-reactiva es una proteína de fase aguda, presente en el suero de pacientes sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayoría de procesos infecciosos bacterianos y virales, tejidos dañados, inflamación y neoplasias malignas.
• El incremento de concentración de esta proteína se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación pudiendo alcanzar niveles de 300 mg/L en 12-24 horas.

FUNDAMENTOS

• La PCR-Látex es una técnica de aglutinación para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.

MATERIALES

Tarjeta látex

Bote para desechos

Micropipeta y puntas

REACTIVOS

Control positivo

Látex

PROCEDIMIENTO

• PREPARAMOS CONTROL POSITIVO.

1. Atemperamos los controles a temperatura ambiente.
2. Depositamos una gota (50 μL) de control positivo en uno de los círculos de la tarjeta de látex.
   
3. Mezclamos el reactivo de FR-Látex vigorosamente antes de usar. Depositamos una gota junto a la anterior.
4. Mezclamos con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo
5. Agitamos con cuidado la tarjeta durante 2 minutos para que aparezcan los resultados.
   

• MÉTODO SEMICUANTITATIVO.

1. Depositamos 50 μL de solución salina fisiológica sobre cada uno de los seis círculos de la tarjeta.
   
2. Depositamos 50 μL de muestra (utilizamos control positivo) en el primer círculo.
   
3. Realizamos diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L. El volumen de paso es de 50 μL.
4. Pasamos 50 μL del primer círculo al número 2 y resuspendemos.
5. Pasamos 50 μL del círculo 2 al número 3 y resuspendemos.
6. Pasamos 50 μL del círculo 3 al número 4 y resuspendemos.
7. Pasamos 50 μL del círculo 4 al número 5 y resuspendemos.
8. Pasamos 50 μL del círculo 5 al número 6, resuspendemos y desechamos 50 μL.
   
9. Añadimos una gota de látex a cada uno de los círculos y mezclamos las gotas con un palillo.
   
10. Agitamos con cuidado la tarjeta durante 2 minutos y esperamos a que aparezcan los resultados.

RESULTADOS

• Examinamos macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación. Observamos aglutinación hasta el círculo número 2, por lo que su título sería 2.
• La concentración aproximada de PCR en la muestra sería: 6 x Título de PCR = mg/L, así que: 6 x 2 = 12 mg/L de PCR en muestra