Práctica 5. Serodiagnóstico de Toxoplasmosis por hemoaglutinación indirecta 15/10/2019

OBJETIVOS

•  El objetivo deesta práctica es realizar la determinación cuantitativa de anticuerpos séricos dirigidos contra Toxoplasma gondii por hemoaglutinación indirecta.

UTILIDAD CLÍNICA

• Esta técnica es muy importante, ya que produce una infección denominada Toxoplasmosis, que suele cursar de un modo asintomático, generalmente durante la infancia y la adolescencia. Puede originar infección sintomática que puede presentarse:
• En forma clínica linfática lever, con linfoadenopatías, mononucleosis benigna, etc.
• Como infección diseminada con evolución clínica fulminante, con hepatitis, meninigoencefalitis, etc.
• La infección puede adquirirse a través de los alimentos infectados con ooquistes excretados por gatos, por la ingestión de alimentos infectados o por via congénita.

FUNDAMENTOS

• Esta técnica se basa en el principio de la hemoaglutinación indirecta. Los hematíes sensibilizados están constituidos por hematíes de ovino recubiertos por un antígeno toxoplasmático. Esta técnica permite detectar las IgG y las IgM anti-toxoplasmáticas. Es posible diferenciarlos tratando el suero con 2-mercaptoetanos el cual inhibe el poder aglutinante de las IgM.
• La presencia de anticuerpos anti-Toxoplasma gondii séricos provoca una aglutinación de los hematíes sensibilizados que se traduce en un velo rojo/marrón que tapiza el pocillo. En ausencia de anticuerpos específicos, estos hematíes se sedimentan en el fondo de pocillo como un anillo.

MATERIALES

Microplacas con fondo en U

Prepipeta

Pipetas graduadas

Micropipeta

Puntas micropipeta

Contenedor desechos

COMPONENTES DEL KIT

Control positivo toxoplasmosis

Tampón fosfato

Hematíes sensibilizados y hematíes no sensibilizados

PROCEDIMIENTO

• Dilución madre de suero

1. Preparamos una dilución madre del suero a analizar (1/40). En un tubo de hemólisis:

1. 50 μL de suero.
2. 1,95 mL de tampón fosfato.
   

• Realización de la prueba en microplaca

1. Dispensamos 50 μL de tampón fosfato en 8 pocillos de la microplaca.
   
2. Dispensar 50 μL de la dilución madre en el primer pocillo.
3. Mezclamos con el tamopón y transferir 50 μL del primer pocillo, al segundo, del segundo al tercero, y asi sucesivamente hasta el 6º pocillo. No debemos olvidar descartar 50 μL del 6º pocillo. Obtenemos:
   
4. Dispensamos 50 μL de la dilución madre de suero en el pocillo número 7. Mezclamos con el tampón y descartamos 50 μL.
5.  Agitamos cuidadosamente las suspensiones de hematíes, y a continuación:
1. Depositamos 1 gota de hematíes sensibilizados en los 6 primeros pocillos.
   
2. Depositamos 1 gota de hematíes no sensibilizados en el 7º pocillo.
   
3. Depositamos 1 gota de hematíes sensibilizados en el 8º pocillo, cuyo papel es controlar la validez del tampón y de los hematíes sensibilizados.
6. Homogeneizamos, tapamos la placa con parafilm y la dejamos reposar durante 2 horas.
   

RESULTADOS

•  Interpretamos que los resultados obtenidos son negativos, ya que en todos los pocillos se forma un anillo en vez de un velo rojo/marrón que tapiza el pocillo. 
  
• Esto puede deberse a algún error durante la realización de la práctica, como realizar mal la dilución, los reactivos no funcionan, etc.