Práctica 6. Rosa de Bengala 15/10/2019

OBJETIVOS

•  El objetivo de esta práctica es detectar anticuerpos anti-Brucella en suero humano.

UTILIDAD CLÍNICA

• El diagnóstico de la brucelosis puede establecerse bien sea por el aislamiento del microorganismo en sangre o heces, o por la demostración de la presencia de anticuerpos específicos en el suero del paciente. El reactivo, debido a su formulación en un tampón de pH ácido, es capaz de reaccionar con anticuerpos IgG o IgM, por lo que es muy útil para el diagnóstico de individuos en fase crónica de la enfermedad, los cuales presentan un nivel eleavdo de anticuerpos IgG difícilmente detectables por el método tradicional de aglutinación en tubo (Wright).

FUNDAMENTOS

• El Rosa de Bengala es una técnica de aglutinación para la detección cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos anti-Brucela en suero humano. La suspensión bacteriana y coloreada, es aglutinada por anticuerpos IgG o IgM presentes en el suero del paciente.

MATERIALES

Bote para desechos

Micropipeta y puntas

REACTIVOS

Rosa de Bengala

Controles positivo y negativo

SSF

MUESTRA

Muestra del kit

PROCEDIMIENTO

• PREPARAMOS CONTROL POSITIVO Y NEGATIVO.

1. Atemperamos los controles a temperatura ambiente.
2. Depositamos una gota (50 μL) de control positivo y control negativo en diferentes círculos de la tarjeta de látex.
3. Mezclamos el reactivo de Rosa de Bengala vigorosamente antes de usar. Depositamos una gota junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclamos las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Es muy importante emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Agitamos con cuidado la tarjeta durante 4 minutos para que aparezcan los resultados.
   

• MÉTODO SEMICUANTITATIVO. 

1. Depositamos 50 μL de solución salina fisiológica sobre cada uno de los seis círculos de la tarjeta.
   
    
2. Depositamos 50 μL de muestra en el primer círculo.
   
3. Realizamos diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L. El volumen de paso es de 50 μL.
4. Pasamos 50 μL del primer círculo al número 2 y resuspendemos.
   
5. Pasamos 50 μL del círculo 2 al número 3 y resuspendemos.
6. Pasamos 50 μL del círculo 3 al número 4 y resuspendemos.
7. Pasamos 50 μL del círculo 4 al número 5 y resuspendemos.
8. Pasamos 50 μL del círculo 5 al número 6, resuspendemos y desechamos 50 μL.    
9. Añadimos una gota de Rosa de Bengala a cada uno de los círculos y mezclamos las gotas con un palillo.
   
10. Agitamos con cuidado la tarjeta durante 4 minutos y esperamos a que aparezcan los resultados.
    

RESULTADOS

•  Examinamos macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación. Observamos aglutinación hasta el círculo número 2, por lo que su título sería 2.
• La concentración aproximada de anticuerpos anti-Brucella en la muestra del paciente se obtiene: 25 x Título de anti-Brucella =  μL/mL, así que: 25 x 2 = 50 μL/mL.